|
|
Optimalizace postupů hodnocení antibakteriální aktivity vybraných účinných látek vůči zvolenému spektru bakteriálních patogenů
BRZÁKOVÁ, Michaela
Tato práce pojednává o optimalizaci postupů hodnocení antibakteriální aktivity účinných látek vůči bakteriálním patogenům Pectobacterium carotovorum, Pseudomonas syringae pv. tomati a Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis. Literární rešerše se zabývá proteiny hlíz brambor, především proteiny s antibakteriální aktivitou, dále je uveden stručný přehled mechanismů účinku rostlinného obranného systému vůči patogenním mikroorganismům a účinku antimikrobiálních látek na bakteriální patogeny. Experimentální část práce se zabývá optimalizací metody stanovení titru bakterií pomocí McFarlandových standardů, stanovení koncentrace bakteriální suspenze pomocí MPN metody a hodnocením antibakteriální účinnosti vybrané skupiny aktivních látek pomocí resazurinového testu. Bylo zjištěno, že v souvislosti s rostoucí optickou densitou měřenou spektrometrem při 620 nm roste zároveň i koncentrace bakteriální suspenze (CFU/ml). U použitých proteinů hlíz brambor odrůd Bella a Westamyl byla pomocí metody SDS-PAGE identifikována skupina bílkovin patatinového komplexu a skupina inhibitorů proteas, u kterých došlo vlivem esterifikace methylací v posunu molekulové hmotnosti. Antimikrobiální aktivita těchto proteinů byla ověřena v resazurinovém testu, kde byla zjištěna inhibiční schopnost modifikovaných hlízových proteinů odrůd Bella a Westamyl ve vyšších koncentracích (10 mg/ml) vůči bakterii Pseudomanas syringae pv. tomati.
|
|
| |
|
|
Larvae of flesh fly Neobellieria bullata as a source for novel antimicrobial peptides
Neubauerová, Tereza ; Macková, Martina ; Macek, Tomáš ; Šanda, Miloslav ; Voburka, Zdeněk
The antibiotic resistant strains of microorganisms are increasing threat for public health. Antimicrobial peptides from natural sources display a wide spectrum of activity. In our laboratory, several peptide fractions with antimicrobial acivity against gram-positive and gramnegative bacteria and fungi were isolated from larvae of flesh fly Neobellieria bullata. The presence of peptides was proved by tricine electrophoresis, molecular weights and sequences determination by MS and Edman sequencing, respectively. In comparison with database sequences we obtained structures present mainly in insect and amphibian antimicrobial peptides, but total matches were not higher than in 36%. Upon the obtained sequence motifs we designed structures of several synthetic peptides. These were synthetised on the Rink amide MBHA resin. Synthesis was performed according Fmoc/PyBOP-DIEA protocol. Antimicrobial activity of these peptides was determined.
|
|
|
Identification and characterization of histidine-rich peptides from hard ticks \kur{Ixodes ricinus} and \kur{Ixodes scapularis}.
DORŇÁKOVÁ, Veronika
Antimicrobial (cationic) proteins play an important role in innate imunity. Such proteins can possess antibacterial, antiendotoxic or fungicidal abilities. The rising resistence of microbes to common antibiotics evokes acute need of studying more endogenous proteins to reveal new potential antibiotics. Ticks, the blood-feeding ectoparasites with effectual defense system, present an endless source of newly described and unknown antimicrobial peptides/proteins with significant theurapeutic potential. This study represents identification of histidine-rich proteins detected in Ixodes ricinus and Ixodes scapularis, that are related to recently described new family of proteins isolated from Rhipicephalus microplus (protein microplusin) and Amblyomma hebraeum (protein heraein). Analysis and characterization of newly identified histidine rich proteins, study of their antimicrobial and protease inhibitory effect are the main goals of this study.
|
|
|
Ricinusin - nový antimikrobiální peptid z klíštěte \kur{Ixodes ricinus}: třetí člen rodiny klíštěcích obranných proteinů bohatých na histidin.
DORŇÁKOVÁ, Veronika
Nový gen kódující antimikrobiální protein {--} ricinusin {--} byl charakterizován u klíštěte I. ricinus. Získaná 405 bp dlouhá cDNA obsahuje jeden čtecí rámec (135 aminokyselin), který kóduje protein velký 14.5 kDa s 19 aminokyselin dlouhou signální sekvencí. Diferenciální exprese ricinusinu byla indukována sáním u larvy, nymfy i dospělců. Výrazná exprese tohoto genu ve slinných žlázách a ve střevě ukázala, že ricinusin se podílí na širokém spektru imunitních reakcí. Analýza genomové sekvence ricinusinu neprokázala přítomnost intronů. Pro studium antimikrobiální aktivity ricinusinu a jeho účinnost proti zmíněným patogenům, včetně infekce bakterií Borrelia burgdorferi, byl za použití bakteriálního expresního systému získán rekombinantní protein. Analýza proteinové sekvence ricinusinu prokázala přítomnost unikátní HEAHEAHEA repetice a podobnost ricinusinu k antimikrobiálním peptidům (AMPs) z klíštěte Boophilus microplus a Amblyomma hebraeum se stejnými vlastnostmi. Ricinusin se tímto stal třetím členem nové rodiny klíštěcích obranných peptidů bohatých na histidin.
|
host ::
RSS.